Plásmido CRISPR de Activación (h) Hus1: sc-403287-ACT

El gen humano **HUS1** codifica Hus1, un componente central de la abrazadera de control de punto de control **9-1-1** (RAD9A–RAD1–HUS1), que se carga sobre el ADN dañado para coordinar la vigilancia del genoma. Este complejo promueve la señalización dependiente de **ATR**, contribuye a la estabilización de las horquillas de replicación y facilita la elección de la vía de reparación del ADN mediante interacciones con mediadores como **TOPBP1** y múltiples factores de reparación. Al vincular la detección del daño en el ADN con el control del punto de control del ciclo celular, Hus1 ayuda a limitar la inestabilidad genómica asociada a la replicación. La desregulación de los procesos de punto de control 9-1-1/ATR se estudia con frecuencia en el contexto de la carga mutacional, los fenotipos de inestabilidad cromosómica y los defectos en la respuesta al daño del ADN relevantes para la biología del cáncer y los trastornos hereditarios del mantenimiento del genoma.

Hus1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HUS1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Hus1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HUS1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HUS1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Hus1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HUS1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Hus1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Hus1 en células tumorales con expresión de HUS1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.