Plasmide Double Nickase (h) HuC: sc-400172-NIC

ELAVL3 (HuC) est une protéine de liaison à l’ARN enrichie dans les neurones, qui reconnaît des éléments riches en AU dans les transcrits cibles et régule l’expression génique post-transcriptionnelle en contrôlant la stabilité, la localisation et la traduction des ARNm. Elle contribue à la différenciation et au maintien des neurones en façonnant des régulons d’ARN liés à la fonction synaptique et à la dynamique du cytosquelette, et s’inscrit dans des voies plus larges de traitement de l’ARN, notamment l’épissage alternatif et la biologie des granules d’ARN induits par le stress. Les altérations de l’activité des protéines neuronales de liaison à l’ARN et des programmes transcriptomiques en aval sont fréquemment étudiées dans le cadre des mécanismes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, où ELAVL3 sert de marqueur et de nœud fonctionnel de la régulation génique spécifique des neurones. Les recherches sur ELAVL3 chez l’humain examinent souvent comment le contrôle de l’ARN dépendant de HuC influence la maturation neuronale, l’excitabilité et la vulnérabilité au stress cellulaire.

HuC Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ELAVL3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ELAVL3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ELAVL3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ELAVL3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.