Plásmido Doble Nickase (h) HuB: sc-400169-NIC

ELAVL2 (HuB) es una proteína de unión a ARN enriquecida en neuronas de la familia Hu/ELAV que reconoce elementos ricos en AU en transcritos diana para regular la estabilidad del ARNm, el empalme alternativo y la traducción. Al moldear programas de expresión génica posranscripcional, HuB influye en la diferenciación neuronal, la guía axonal, la función sináptica y la plasticidad dependiente de la actividad, e interactúa con vías que controlan el procesamiento de ARN y la traducción local. La desregulación de la expresión o función de ELAVL2 se ha vinculado con alteraciones en redes génicas neuronales observadas en contextos de neurodesarrollo y neurodegeneración, lo que la hace relevante para estudiar mecanismos que acoplan el metabolismo del ARN al fenotipo neuronal. La modulación experimental de HuB ofrece una herramienta para investigar cómo las proteínas de unión a ARN coordinan la dinámica del transcriptoma en modelos neuronales humanos.

HuB El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ELAVL2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ELAVL2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ELAVL2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ELAVL2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.