HspBP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406487

概要

HSPBP1は、ATP/ADP交換とクライアント（基質）放出を調節することでHSP70/HSC70シャペロン・サイクルを制御する、ヌクレオチド交換因子（NEF）かつコシャペロンであるHspBP1をコードします。分子シャペロンとの相互作用を通じて、HspBP1はプロテオスタシス、ストレス応答シグナル伝達、ならびに誤折り畳みまたは損傷タンパク質の品質管理に寄与し、そうしたタンパク質が蓄積して細胞恒常性を乱すことを防ぎます。HSP70の補助因子バランスを含むシャペロン・ネットワークの破綻は、神経変性やがん生物学などの文脈で、タンパク質代謝回転やストレス耐性の変化としばしば関連するため、HSPBP1は機序解析に有用な結節点となります。ヒト細胞では、HspBP1を撹乱することで、シャペロン介在性のフォールディングがタンパク質分解経路やストレス適応的リモデリングとどのように交差するかを明らかにするのに役立ちます。

HspBP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHSPBP1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HSPBP1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HSPBP1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HspBP1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HspBP1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HSPBP1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HspBP1の機能に不可欠なHSPBP1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HSPBP1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HspBP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHspBP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HSPBP1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HspBP1 HDRプラスミド（h）および HspBP1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHSPBP1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHSPBP1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。