Plasmide Double Nickase (h) HSPA5/BiP/GRP78: sc-400073-NIC

HSPA5 code pour la chaperonne résidente du RE BiP/GRP78 (HSPA5), un régulateur central de la protéostasie qui se lie aux polypeptides naissants, empêche leur agrégation et favorise le repliement ainsi que l’assemblage des protéines sécrétées et des protéines membranaires. En tant que capteur et effecteur majeur de la réponse aux protéines mal repliées (UPR), HSPA5 module la signalisation du stress du RE via les voies PERK–EIF2α, IRE1–XBP1 et ATF6, influençant la traduction, le contrôle qualité et les programmes transcriptionnels d’adaptation. HSPA5 participe également à la dégradation associée au RE (ERAD) et à l’homéostasie du calcium, reliant la capacité de repliement aux états rédox et métaboliques. Une activité dérégulée de HSPA5 est associée à des maladies marquées par un stress protéotoxique chronique, notamment en biologie tumorale, dans les maladies neurodégénératives, les dysfonctions métaboliques et les états inflammatoires, ce qui en fait un nœud clé pour les études mécanistiques de l’adaptation au stress.

HSPA5/BiP/GRP78 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HSPA5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HSPA5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HSPA5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HSPA5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.