Plásmido Doble Nickase (h) HSP70-2: sc-417733-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)HSP70-2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa HSP70-2 (h) y el plásmido de doble nickasa HSP70-2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a HSPA1B. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HSP70 Anticuerpo (F-3): sc-373867
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) HSP70-2 | sc-417733-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) HSP70-2 | sc-417733-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSPA1B codifica la proteína de choque térmico inducible HSP70-2, una chaperona molecular central dependiente de ATP que estabiliza proteínas nacientes y desnaturalizadas por estrés para preservar la proteostasis. HSP70-2 participa en la respuesta al choque térmico mediante la transcripción regulada por HSF1 y coordina decisiones de plegamiento, replegamiento y selección de destino (triage) con co-chaperonas y con las vías de ubiquitina–proteasoma y de autofagia. Al limitar la agregación de proteínas y modular la señalización del estrés, HSP70-2 influye en la supervivencia celular bajo condiciones de estrés proteotóxico, oxidativo e inflamatorio. La actividad desregulada de la red de HSP70 se ha vinculado con cambios en la tolerancia al estrés y en la homeostasis proteica en diversos contextos relevantes para enfermedades, incluidos la neurodegeneración, la adaptación de las células cancerosas al estrés y alteraciones de la señalización inmunitaria.
HSP70-2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HSPA1B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HSPA1B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HSPA1B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HSPA1B alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.