HSP 27 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400285-ACT

HSPB1 codifica a proteína de choque térmico 27 (HSP27), uma pequena chaperona de choque térmico que estabiliza proteínas desnaturadas e sustenta a proteostase durante o estresse celular. A HSP27 modula a dinâmica do citoesqueleto de actina, regula a sinalização apoptótica e contribui para respostas redox e inflamatórias por meio de redes de quinases ativadas por estresse, incluindo as vias MAPK/p38. Por meio de sua oligomerização dependente de fosforilação e de interações com proteínas cliente, a HSP27 influencia a sobrevivência celular, a migração e a biologia dos grânulos de estresse. A desregulação da expressão ou da função de HSPB1 tem sido associada à adaptação de células cancerígenas ao estresse, a processos neurodegenerativos e a modelos de lesão cardiometabólica, tornando-o um alvo amplamente utilizado em estudos de vias e mecanismos.

HSP 27 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HSPB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HSP 27 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HSPB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HSPB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HSP 27. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HSPB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HSP 27 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HSP 27 em células tumorais com expressão de HSPB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.