HSP 27 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400285-ACT

HSPB1 codifica la proteina da shock termico 27 (HSP 27), una piccola chaperone da shock termico che stabilizza le proteine non correttamente ripiegate e sostiene la proteostasi durante lo stress cellulare. HSP 27 modula la dinamica del citoscheletro di actina, regola la segnalazione apoptotica e contribuisce alle risposte redox e infiammatorie attraverso reti di chinasi attivate dallo stress, incluse le vie MAPK/p38. Grazie alla sua oligomerizzazione dipendente dalla fosforilazione e alle interazioni con proteine “client”, HSP 27 influenza la sopravvivenza cellulare, la migrazione e la biologia dei granuli di stress. Un’espressione o una funzione deregolata di HSPB1 è stata associata all’adattamento delle cellule tumorali allo stress, a processi neurodegenerativi e a modelli di danno cardiometabolico, rendendolo un nodo ampiamente utilizzato per studi di vie e meccanismi.

HSP 27 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HSPB1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HSP 27 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HSPB1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HSPB1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HSP 27. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HSPB1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HSP 27 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HSP 27 nelle cellule tumorali con espressione di HSPB1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.