Plasmide Double Nickase (h) HSP 105: sc-402155-NIC

HSPH1 code la protéine de choc thermique HSP105, une chaperonne moléculaire de haut poids moléculaire induite par le stress protéotoxique, qui aide à prévenir l’agrégation des protéines et favorise le repliement de protéines clientes mal conformées dans le cytosol. HSP105 coopère avec les systèmes de chaperonnes HSP70/HSP40 et contribue aux réseaux de protéostase liés à la réponse au choc thermique, au fonctionnement du système ubiquitine–protéasome et à la récupération cellulaire après un stress thermique ou oxydatif. En stabilisant les protéines en situation de stress, HSPH1 influence la résistance à l’apoptose, la progression du cycle cellulaire et des programmes de signalisation d’adaptation au stress. Une activité chaperonne dérégulée et une expression élevée de HSPH1 ont été associées à des contextes de transformation maligne et à d’autres états caractérisés par un déséquilibre de la protéostase, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques sur la tolérance au stress et le contrôle qualité des protéines.

HSP 105 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HSPH1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HSPH1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HSPH1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HSPH1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.