HSF4 Double Nickase Plasmid (h): sc-403850-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HSF4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HSF4 Double-Nickase-Plasmid (h) und HSF4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HSF4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HSF4: sc-398645
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HSF4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403850-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HSF4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403850-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSF4 (Heat-Shock-Transkriptionsfaktor 4) ist ein DNA-bindender Transkriptionsfaktor, der die Proteostase koordiniert, indem er Hitzeschockproteine und andere stressresponsive Gene reguliert, und dabei wichtige Funktionen in Programmen der zellulären Differenzierung übernimmt. In okulären Geweben trägt HSF4 zur Reifung von Linsenfaserzellen und zur Aufrechterhaltung der Protein-Homöostase bei – Prozesse, die eng mit der Organisation des Zytoskeletts, Chaperon-Netzwerken und dem Schutz vor Proteinaggregation verknüpft sind. Eine fehlregulierte HSF4-Aktivität wurde mit erblichen Linsentrübungen und kataraktassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, was die besondere Empfindlichkeit der Linse gegenüber Störungen der Proteinkontrolle widerspiegelt. Als Knotenpunkt in der Transkriptionsschaltkreise der Stressantwort wird HSF4 hinsichtlich seiner Effekte auf Zellzustandsübergänge, die Transkriptionsregulation unter proteotoxischem Stress und nachgelagerte Chaperon-Expressionsprofile untersucht.
HSF4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HSF4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HSF4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HSF4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HSF4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.