HSF1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400432-ACT

熱ショック因子1（HSF1）は、細胞の熱ショック応答における主要な転写制御因子であり、HSP70およびHSP90ネットワークを含む熱ショックタンパク質やコ・シャペロンを誘導することで、ストレス下でのプロテオスタシス（タンパク質恒常性）を維持します。ヒト細胞では、HSF1はプロテオトキシックストレスのシグナルを転写・翻訳制御プログラムと統合し、酸化ストレス、タンパク質の誤折り畳み、環境要因による負荷に対する応答を形作ります。HSF1活性は、タンパク質品質管理、オートファジー、細胞生存の意思決定を司る経路と交差しており、HSF1に連結したストレス応答プログラムの制御異常は、がんの生物学や神経変性疾患の機序と関連づけられています。そのため、HSF1の発現を調節することは、多様な細胞モデルにおけるストレス適応回路や下流のトランスクリプトーム再構築を解析するうえで有用です。

HSF1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HSF1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HSF1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HSF1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHSF1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HSF1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHSF1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHSF1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHSF1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHSF1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。