HS6ST1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405111

概要

HS6ST1は、ヘパラン硫酸プロテオグリカンの成熟過程において、グルコサミン残基の6-O-硫酸化を触媒するゴルジ体局在酵素であるヘパラン硫酸6-O-スルホトランスフェラーゼ1をコードします。この修飾により、複数のモルフォゲンや増殖因子の分布とシグナル伝達能を制御するヘパラン硫酸の結合部位が形成され、受容体型チロシンキナーゼシグナル伝達、細胞—マトリックス相互作用、発生パターニングなどの過程に影響を及ぼします。ヘパラン硫酸の微細構造を調節することで、HS6ST1は状況依存的にFGF、WNT、BMP、Hedgehogなどのシグナル伝達経路を調整し得ます。HS6ST1が関与するヘパラン硫酸の硫酸化プログラムの変化は、がん生物学における細胞間コミュニケーションの破綻や神経発達表現型と関連づけられており、細胞外シグナル制御の機構研究における有用な標的（ノード）となります。

HS6ST1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHS6ST1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HS6ST1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HS6ST1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HS6ST1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HS6ST1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HS6ST1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HS6ST1の機能に不可欠なHS6ST1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HS6ST1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HS6ST1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHS6ST1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HS6ST1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HS6ST1 HDRプラスミド（h）および HS6ST1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHS6ST1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHS6ST1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。