HS3ST3B1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-409765

概要

HS3ST3B1 は、ヘパラン硫酸グルコサミン 3-O-スルホトランスフェラーゼ 3B1 をコードしており、ヘパラン硫酸鎖の 3-O-硫酸化を触媒するゴルジ体局在酵素です。この修飾は、細胞外リガンドに対するヘパラン硫酸の結合部位を規定するのに寄与し、細胞表面および細胞外マトリックスにおけるシグナル伝達の微小環境を形成します。ヘパラン硫酸の微細構造を調節することで、HS3ST3B1 は増殖因子やケモカインのシグナル伝達、細胞間相互作用、接着依存的な遊走などの過程に影響を及ぼし得ます。ヘパラン硫酸の硫酸化パターンの変化は、がん生物学、炎症、組織リモデリングに関与するシグナル伝達ネットワークの破綻と関連しており、そのため HS3ST3B1 は、グリコサミノグリカン依存性経路の機構解析に有用な標的となります。

HS3ST3B1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHS3ST3B1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HS3ST3B1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HS3ST3B1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HS3ST3B1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HS3ST3B1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HS3ST3B1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HS3ST3B1の機能に不可欠なHS3ST3B1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HS3ST3B1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HS3ST3B1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHS3ST3B1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HS3ST3B1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HS3ST3B1 HDRプラスミド（h）および HS3ST3B1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHS3ST3B1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHS3ST3B1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。