HRC CRISPR Activation Plasmid (m): sc-420947-ACT

Das murine Hrc kodiert das histidinreiche, kalziumbindende Protein (HRC), eine luminale Komponente des sarkoplasmatischen Retikulums, die die Ca²⁺-Speicherung und -Freisetzung moduliert, indem sie die Aktivität des Ryanodinrezeptors sowie die SERCA-abhängige Wiederaufnahme beeinflusst. Durch seine Wirkung auf die Erregungs‑Kontraktions‑Kopplung und die intrazelluläre Kalziumhomöostase trägt HRC zur Funktion von Kardiomyozyten und Skelettmuskel bei, in denen ein präzises Ca²⁺-Zykling Kontraktilität und Stressantworten steuert. Eine dysregulierte Hrc-Expression oder ein verändertes Ca²⁺-Handling wird häufig im Kontext kardialen Remodelings, arrhythmogener Mechanismen und myopathieassoziierter Phänotypen untersucht. Als zentraler Regulator der SR-Kalziumdynamik ist HRC für Signalwege relevant, die die Kalziumsignalgebung, Proteostase und die Muskelanpassung an physiologische und pathologische Reize steuern.

HRC Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Hrc-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HRC Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Hrc-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Hrc-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HRC-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Hrc-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HRC-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HRC-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Hrc-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.