HoxD10 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403328-ACT

HOXD10 kodiert den Homeobox-Transkriptionsfaktor HoxD10, einen zentralen Regulator der anterior-posterioren Musterbildung und der Extremitätenmorphogenese, der durch sequenzspezifische DNA-Bindung und transkriptionelle Kontrolle zur Festlegung der Zellidentität beiträgt. In differenzierten Geweben ist HOXD10 an Programmen beteiligt, die Zellmigration, Adhäsion und den Umbau der extrazellulären Matrix steuern, und ist in entwicklungsbezogene Transkriptionsnetzwerke und Signalwege eingebunden, die die Lineage-Festlegung prägen. Eine veränderte HOXD10-Expression oder eine Störung seiner Regulation wurde mit onkogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter Veränderungen der Invasivität und des metastatischen Potenzials, was seine Rolle bei der Kontrolle von Gensätzen widerspiegelt, die mit epithelial-mesenchymalen Dynamiken verknüpft sind. Als Entwicklungsregulator mit kontextabhängiger Aktivität wird HOXD10 häufig genutzt, um transkriptionelle Schaltkreise, Chromatinregulation und krankheitsrelevante Genexpressionszustände in humanen Zellmodellen zu untersuchen.

HoxD10 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HOXD10-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HoxD10 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HOXD10-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HOXD10-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HoxD10-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HOXD10-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HoxD10-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HoxD10-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HOXD10-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.