Plasmide CRISPR d'Activation (m) HoxB5: sc-420914-ACT

Hoxb5 code le facteur de transcription à homéoboîte HoxB5, un régulateur se liant à l’ADN de manière spécifique à la séquence, qui met en place l’axe antéro-postérieur et orchestre l’identité régionale au cours de l’embryogenèse. Chez la souris, HoxB5 contribue à coordonner des réseaux de régulation génique du développement qui contrôlent la spécification des cellules progénitrices, la temporalité de la différenciation et la morphogenèse tissulaire, en s’intégrant à des programmes plus larges du cluster HOX et à un contrôle transcriptionnel médié par la chromatine. Son activité influe sur des voies qui régissent l’organogenèse ainsi que des processus liés à l’hématopoïèse et aux cellules de la crête neurale, domaines où les altérations d’expression des gènes HOX sont fréquemment étudiées dans le contexte d’une différenciation dérégulée et d’états prolifératifs. Parce que les facteurs HOX occupent une position élevée dans les hiérarchies de régulation, Hoxb5 est largement utilisé pour explorer les circuits transcriptionnels du développement et les mécanismes de programmation des lignages pertinents pour des modèles de maladie.

HoxB5 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Hoxb5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HoxB5 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Hoxb5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Hoxb5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HoxB5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Hoxb5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HoxB5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HoxB5 dans les cellules tumorales présentant une expression de Hoxb5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.