Plásmido CRISPR de Activación (m) HoxB5: sc-420914-ACT

Hoxb5 codifica el factor de transcripción homeobox HoxB5, un regulador de unión al ADN específico de secuencia que establece el patrón del eje anteroposterior y coordina la identidad regional durante la embriogénesis. En el ratón, HoxB5 ayuda a coordinar redes reguladoras génicas del desarrollo que controlan la especificación de células progenitoras, el momento de la diferenciación y la morfogénesis tisular, integrándose con programas más amplios del clúster HOX y con el control transcripcional mediado por la cromatina. Su actividad influye en vías que rigen la organogénesis y procesos asociados a la hematopoyesis y a la cresta neural, donde la alteración de la expresión de HOX se estudia con frecuencia en el contexto de la diferenciación desregulada y de estados proliferativos. Dado que los factores HOX se sitúan en niveles altos de las jerarquías regulatorias, Hoxb5 se utiliza ampliamente para explorar los circuitos transcripcionales del desarrollo y los mecanismos de programación de linaje relevantes para modelos de enfermedad.

HoxB5 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Hoxb5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HoxB5 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Hoxb5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Hoxb5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HoxB5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Hoxb5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HoxB5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HoxB5 en células tumorales con expresión de Hoxb5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.