Plásmido CRISPR de Activación (m) HoxA10: sc-420900-ACT

Hoxa10 codifica el factor de transcripción homeobox HoxA10, un regulador de unión al ADN específico de secuencia que establece el patrón del eje anteroposterior durante la embriogénesis y ayuda a especificar la identidad regional en los sistemas urogenital y hematopoyético en desarrollo. En tejidos adultos, HoxA10 contribuye a los programas de compromiso de linaje y diferenciación al coordinar redes transcripcionales con cofactores como PBX y MEIS, influyendo en el estado de la cromatina y en la expresión génica aguas abajo. La expresión alterada de HOXA10 se ha asociado con anomalías del desarrollo y estados de diferenciación desregulados, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar el control transcripcional de la morfogénesis y las decisiones de destino celular en modelos murinos. Su actividad se cruza con vías que regulan la proliferación y la diferenciación, lo que respalda la investigación sobre la regulación génica dependiente del contexto en el desarrollo y en fenotipos relevantes para enfermedades.

HoxA10 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Hoxa10 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HoxA10 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Hoxa10 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Hoxa10, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HoxA10. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Hoxa10 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HoxA10 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HoxA10 en células tumorales con expresión de Hoxa10 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.