Plasmide Double Nickase (m) hnRNP E1: sc-423930-NIC

Le gène murin *Pcbp1* code la ribonucléoprotéine nucléaire hétérogène E1 (hnRNP E1), une protéine liant l’ARN qui reconnaît des motifs poly(C) afin de contrôler la stabilité des ARNm, leur traduction et leur maturation alternative. hnRNP E1 participe à des réseaux de régulation post‑transcriptionnelle qui façonnent la progression du cycle cellulaire, les programmes de différenciation et l’expression génique en réponse au stress, et peut coupler la régulation de l’ARN à un remodelage de l’expression génique dépendant des signaux. Par ses rôles dans l’assemblage de complexes ribonucléoprotéiques et le contrôle traductionnel, hnRNP E1 influence des voies liées à la plasticité épithéliale et à la dynamique du cytosquelette. Une activité altérée de PCBP1/hnRNP E1 a été associée à une dérégulation du métabolisme de l’ARN dans des contextes liés au cancer et dans d’autres troubles où la fidélité du traitement de l’ARN est cruciale.

hnRNP E1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Pcbp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Pcbp1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Pcbp1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Pcbp1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.