Plásmido CRISPR de Activación (h) hnRNP D0: sc-401911-ACT

HNRNPD codifica hnRNP D0 (AUF1), una proteína de unión a ARN que reconoce elementos ricos en AU en las regiones 3′ UTR y modula el recambio y la traducción del ARNm. Al controlar la estabilidad de transcritos implicados en inflamación, respuestas al estrés, progresión del ciclo celular y apoptosis, hnRNP D0 contribuye a configurar redes reguladoras génicas postranscripcionales y la proteostasis. Participa en el ensamblaje de complejos ribonucleoproteicos e influye en el procesamiento alternativo del ARN, lo que la vincula a programas de señalización como las salidas transcripcionales asociadas a citocinas/NF-κB y a la senescencia celular. La alteración de la expresión de hnRNP D0 o de su actividad de unión al ARN se ha asociado con una producción desregulada de citocinas y fenotipos oncogénicos, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar el metabolismo del ARN relevante para enfermedades.

hnRNP D0 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HNRNPD sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

hnRNP D0 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HNRNPD en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HNRNPD, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de hnRNP D0. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HNRNPD y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de hnRNP D0 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía hnRNP D0 en células tumorales con expresión de HNRNPD silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.