Plasmide CRISPR d'Activation (h) hnRNP C1/C2: sc-400993-ACT

HNRNPC code pour les ribonucléoprotéines nucléaires hétérogènes C1/C2 (hnRNP C1/C2), des protéines nucléaires abondantes se liant à l’ARN, qui s’assemblent sur le pré‑ARNm naissant afin de réguler le choix des sites d’épissage, la fidélité de l’épissage alternatif et la maturation de l’ARNm. hnRNP C1/C2 participe au traitement co‑transcriptionnel de l’ARN, influence l’export et la stabilité des ARNm, et contribue au maintien de l’intégrité du transcriptome en coordonnant la formation de complexes ribonucléoprotéiques. Par ces fonctions, elle s’inscrit au cœur des programmes fondamentaux d’expression génique, notamment des voies du métabolisme de l’ARN et des réponses transcriptionnelles liées au cycle cellulaire. Une expression dérégulée de HNRNPC ou une activité anormale de hnRNP C1/C2 a été associée à des paysages d’épissage modifiés et à un traitement aberrant de l’ARN observés dans de multiples contextes pathologiques, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans l’étude de phénotypes dépendants de l’ARN.

hnRNP C1/C2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HNRNPC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

hnRNP C1/C2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HNRNPC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HNRNPC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de hnRNP C1/C2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HNRNPC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de hnRNP C1/C2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie hnRNP C1/C2 dans les cellules tumorales présentant une expression de HNRNPC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.