Plasmide Double Nickase (m) hnRNP A1: sc-420895-NIC

Hnrnpa1 chez la souris code la ribonucléoprotéine nucléaire hétérogène A1 (hnRNP A1), une protéine de liaison à l’ARN exprimée de manière ubiquitaire, qui couple l’épissage du pré-ARNm, l’export de l’ARNm et la traduction via des interactions dynamiques avec des composants du spliceosome et des granules ribonucléoprotéiques. hnRNP A1 régule le choix alternatif des exons et des programmes de métabolisme de l’ARN qui influencent la progression du cycle cellulaire, les réponses au stress et le maintien de l’homéostasie de l’ARN. Son activité est liée au transport nucléocytoplasmique et à l’assemblage des granules de stress, reliant le traitement de l’ARN aux voies activées lors du stress cellulaire et de la différenciation. Un dérèglement de l’épissage médié par hnRNP A1 et de sa liaison à l’ARN a été associé à la neurodégénérescence et à une reprogrammation transcriptionnelle pertinente pour le cancer, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques des défauts de traitement de l’ARN.

hnRNP A1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Hnrnpa1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Hnrnpa1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Hnrnpa1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Hnrnpa1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.