Plasmide Double Nickase (h) hnRNP A1: sc-400704-NIC

HNRNPA1 code pour la ribonucléoprotéine nucléaire hétérogène A1 (hnRNP A1), une protéine multifonctionnelle se liant à l’ARN qui s’associe aux pré‑ARNm afin de réguler l’épissage alternatif, l’export des ARNm et la traduction. hnRNP A1 participe à l’assemblage du spliceosome et à la définition des exons, et contribue également au maintien des télomères via des interactions avec l’ARN contenant des répétitions télomériques et des facteurs se liant à l’ADN télomérique. En coordonnant le traitement et le métabolisme de l’ARN, hnRNP A1 influence la dynamique des granules de stress ainsi que des programmes plus larges d’expression génique liés à la croissance et à la différenciation cellulaires. La dérégulation de HNRNPA1 a été impliquée dans la neurodégénérescence et dans des altérations du traitement de l’ARN pertinentes pour le cancer, ce qui en fait une cible utile pour disséquer les réseaux d’épissage et les voies de protéostasie.

hnRNP A1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HNRNPA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HNRNPA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HNRNPA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HNRNPA1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.