Particules Lentivirales d'Activation (h) hnRNP A0: sc-406924-LAC

HNRNPA0 code hnRNP A0, une protéine liant l’ARN qui s’associe à des complexes mRNP afin de réguler l’expression génique post-transcriptionnelle, notamment la stabilité des ARNm, leur dégradation (turnover) et la traduction de transcrits sélectionnés. Par ces fonctions, elle contribue aux réponses cellulaires au stress et au remodelage dynamique des programmes d’expression génique qui influent sur le contrôle du cycle cellulaire et la signalisation inflammatoire. hnRNP A0 a été étudiée dans le contexte de réseaux de signalisation pilotés par des kinases et de voies du métabolisme de l’ARN qui déterminent le devenir des transcrits en conditions de stress. La dérégulation des protéines de la famille hnRNP et des mécanismes associés de maturation/traitement de l’ARN est fréquemment liée à des phénotypes de prolifération et d’adaptation au stress altérés, pertinents pour la biologie du cancer et d’autres troubles impliquant une expression génique aberrante.

Les particules d'activation lentivirales hnRNP A0 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de HNRNPA0 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales hnRNP A0 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription HNRNPA0, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de hnRNP A0. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif HNRNPA0 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.