HNF-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401082

概要

ONECUT1は、肝細胞核因子6（HNF-6）をコードする遺伝子であり、内胚葉由来組織、とりわけ肝臓および膵臓における遺伝子制御プログラムを統括するCUTホメオボックス型転写因子です。HNF-6は、NotchやTGF-βシグナル伝達とのクロストークを含む発生・肝胆道系経路を転写レベルで制御することにより、上皮分化、管腔（胆管など）の形態形成、代謝関連遺伝子の発現を調節します。ヒト細胞では、ONECUT1活性の変化が、糖恒常性の破綻、膵内分泌発生の異常、肝胆道機能障害と関連づけられており、転写ネットワークの攪乱を研究する上で重要な標的となります。下流標的遺伝子や、他の肝・膵転写因子との協調的相互作用により、HNF-6は系譜決定と代謝制御を解明するための中核ノードとして位置づけられています。

HNF-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるONECUT1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ONECUT1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ONECUT1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HNF-6タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HNF-6シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ONECUT1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HNF-6の機能に不可欠なONECUT1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ONECUT1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HNF-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHNF-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ONECUT1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HNF-6 HDRプラスミド（h）および HNF-6 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはONECUT1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のONECUT1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。