Plásmido Doble Nickase (h) HNF-3α: sc-400743-NIC

FOXA1 (HNF-3α) es un factor de transcripción pionero de tipo hélice alada (winged-helix) que se une a cromatina compactada para establecer accesibilidad reguladora y coordinar programas transcripcionales específicos de linaje en tejidos epiteliales humanos. Regula redes que controlan la diferenciación, la señalización de receptores hormonales y la homeostasis metabólica, incluida la interacción con las vías de los receptores de andrógenos y estrógenos, así como la modulación de la actividad de los potenciadores (enhancers). A través de sus efectos sobre la identidad celular y la salida transcripcional, las alteraciones en la función de FOXA1 se han vinculado con cambios en los estados de proliferación y diferenciación observados en múltiples tipos de tumores y trastornos asociados al sistema endocrino. Por ello, FOXA1 se utiliza ampliamente como modelo para estudiar la remodelación de la cromatina, la selección de potenciadores y la regulación transcripcional dependiente del contexto.

HNF-3α El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FOXA1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FOXA1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FOXA1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FOXA1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.