Plásmido Doble Nickase (h) HMG-I/HMG-Y: sc-402396-NIC

HMGA1 codifica las proteínas arquitectónicas asociadas a la cromatina HMG-I y HMG-Y, que se unen a secuencias de ADN ricas en AT para modular la organización de los nucleosomas y la estructura de la cromatina de orden superior. Al facilitar el ensamblaje del enhanceosoma y alterar la topología del ADN, HMGA1 influye en programas transcripcionales que gobiernan la progresión del ciclo celular, la diferenciación y la señalización sensible al estrés, incluidas vías vinculadas a la regulación de genes inflamatorios. La expresión desregulada de HMGA1 y su ocupación en la cromatina se han asociado con proliferación alterada e inestabilidad genómica en múltiples contextos patológicos, lo que la convierte en un nodo clave en estudios sobre la reprogramación transcripcional oncogénica. En células humanas, HMGA1 también está implicada en la regulación del momento de replicación y en las respuestas al daño del ADN a través de sus efectos sobre la accesibilidad de la cromatina.

HMG-I/HMG-Y El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HMGA1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HMGA1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HMGA1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HMGA1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.