HM74 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-429832

概要

Hcar2 は HM74（GPR109A とも呼ばれる）をコードしており、これは Gi/o 共役型の G タンパク質共役受容体（GPCR）で、ナイアシンや β-ヒドロキシ酪酸などの内因性代謝産物に応答して細胞内 cAMP シグナル伝達を調節します。マウスの免疫組織およびバリア組織において、HM74 は cAMP 依存性経路とその下流の転写プログラムを介して、走化性、炎症性メディエーター産生、ならびに細胞の代謝適応に影響します。受容体活性は、マクロファージや好中球の応答、上皮の恒常性、脂質関連シグナル伝達ネットワークの制御とも関連づけられています。そのため Hcar2/HM74 シグナルの変化は、GPCR を介した免疫—代謝クロストークが重要な要因となる炎症、代謝ストレス、組織障害のモデルにおいて意義を持ちます。

HM74 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるHcar2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Hcar2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Hcar2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HM74タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HM74シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Hcar2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HM74の機能に不可欠なHcar2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Hcar2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HM74 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびHM74 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Hcar2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HM74 HDRプラスミド（m）および HM74 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHcar2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHcar2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。