Plasmide Double Nickase (h) HLA-DRβ5: sc-402985-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HLA-DRβ5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HLA-DRβ5 Double Nickase (h) et le plasmide HLA-DRβ5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HLA-DRB5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HLA-DRβ5 Antibody (4D12): sc-53889
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HLA-DRβ5 | sc-402985-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) HLA-DRβ5 | sc-402985-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HLA-DRB5 code la chaîne β5 de HLA-DR, un composant polymorphe des hétérodimères du CMH de classe II qui présentent aux lymphocytes T CD4+ des peptides dérivés de l’environnement extracellulaire. En s’assemblant avec HLA-DRA dans les cellules présentatrices d’antigènes, HLA-DRβ5 contribue au chargement endosomal des peptides, à la formation de la synapse immunologique et aux programmes d’activation des lymphocytes T en aval qui façonnent les réponses immunitaires adaptatives. Les variations des sillons de liaison aux peptides du CMH de classe II influencent le répertoire antigénique et la tolérance immunitaire, reliant ainsi les loci HLA-DR à la susceptibilité et à la stratification dans de multiples contextes de maladies immuno-médiées et inflammatoires. HLA-DRB5 est donc largement étudié en biologie de la présentation antigénique, en cartographie des haplotypes HLA et dans les mécanismes qui régulent la communication entre CPA et lymphocytes T.
HLA-DRβ5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HLA-DRB5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HLA-DRB5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HLA-DRB5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HLA-DRB5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.