Plásmido CRISPR de Activación (h) HLA-DP β1: sc-401413-ACT

HLA-DPB1 codifica la cadena β1 de HLA-DP, un componente central de los heterodímeros del MHC de clase II que presentan péptidos de origen extracelular a las células T CD4+ y modelan el reconocimiento inmunitario adaptativo. Su expresión se concentra en las células presentadoras de antígeno profesionales y está regulada por programas inducidos por citocinas, incluida la transcripción sensible al interferón-γ, lo que respalda las vías de procesamiento y presentación de antígenos y el cebado de las células T. Las variaciones en los alelos de HLA-DPB1 influyen en los repertorios de unión a péptidos y en la capacidad de respuesta inmunitaria, vinculando este locus con diferencias en la susceptibilidad y los desenlaces en enfermedades autoinmunes e inflamatorias, en la respuesta a enfermedades infecciosas y en la alorreactividad relacionada con trasplantes. Como parte de la región HLA de clase II, la cadena β1 de HLA-DP también sirve como un marcador clave para analizar mecanismos de presentación de antígenos y asociaciones inmunogenéticas en la biología inmunitaria humana.

HLA-DP β1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HLA-DPB1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HLA-DP β1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HLA-DPB1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HLA-DPB1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HLA-DP β1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HLA-DPB1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HLA-DP β1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HLA-DP β1 en células tumorales con expresión de HLA-DPB1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.