HLA-DOβ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406402

Descripción general

HLA-DOB codifica la subunidad HLA-DOβ, que se asocia con HLA-DOα para formar el heterodímero HLA-DO, expresado principalmente en células presentadoras de antígeno. En los endosomas tardíos y los lisosomas, HLA-DO modula la actividad de HLA-DM para ajustar finamente la carga de péptidos en las moléculas del MHC de clase II, configurando el repertorio de péptidos que se muestra a las células T CD4+. Esta regulación vincula a HLA-DOβ con el procesamiento y la presentación de antígenos, la tolerancia inmunitaria adaptativa y las respuestas inmunitarias frente a infecciones. La alteración de la edición de péptidos del MHC de clase II y la variación en la región HLA son relevantes para estudios sobre autoinmunidad, mecanismos de enfermedad inflamatoria e interacciones tumor–sistema inmunitario, en los que la calidad de la presentación de antígenos influye en el reconocimiento inmunitario.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HLA-DOβ (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HLA-DOB en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HLA-DOB junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HLA-DOB tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HLA-DOβ.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HLA-DOB para la investigación de la señalización de HLA-DOβ, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de HLA-DOB críticos para la función de HLA-DOβ
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HLA-DOB para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HLA-DOβ CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HLA-DOβ CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HLA-DOB. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HLA-DOβ (h) y el plásmido HDR HLA-DOβ (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HLA-DOB para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HLA-DOB definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.