HLA-DOβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406402

概要

HLA-DOBはHLA-DOβサブユニットをコードしており、HLA-DOαと対になって、主に抗原提示細胞で発現するHLA-DOヘテロ二量体を形成します。後期エンドソームおよびリソソーム内で、HLA-DOはHLA-DMの活性を調節し、MHCクラスII分子へのペプチド搭載を微調整することで、CD4+ T細胞に提示されるペプチドのレパートリーを形作ります。この制御により、HLA-DOβは抗原プロセシングと提示、適応免疫における免疫寛容、ならびに感染に対する免疫応答と関連づけられます。MHCクラスIIにおけるペプチド編集の変化やHLA領域の多様性は、抗原提示の質が免疫認識に影響する自己免疫、炎症性疾患の機序、腫瘍―免疫相互作用の研究において重要です。

HLA-DOβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHLA-DOB遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HLA-DOB内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HLA-DOBのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HLA-DOβタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HLA-DOβシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HLA-DOB欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HLA-DOβの機能に不可欠なHLA-DOBエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HLA-DOBゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HLA-DOβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHLA-DOβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HLA-DOB遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HLA-DOβ HDRプラスミド（h）および HLA-DOβ HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHLA-DOBホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHLA-DOB標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。