Plásmido Doble Nickase (m) Histone H3.3A: sc-420787-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)Histone H3.3A consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Histone H3.3A (m) y el plásmido de doble nickasa Histone H3.3A (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a H3f3a. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) Histone H3.3A | sc-420787-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) Histone H3.3A | sc-420787-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen murino **H3f3a** codifica la histona **H3.3A**, una variante de H3 independiente de la replicación que se deposita en genes transcritos activamente, potenciadores (enhancers) y otros elementos reguladores para moldear la accesibilidad de la cromatina y la fidelidad transcripcional. La dinámica de recambio de H3.3A contribuye a la dinámica de los nucleosomas durante la transcripción, a las respuestas al estrés de replicación del ADN y al reensamblaje de la cromatina tras el daño en el ADN, vinculándola a procesos como la estabilidad del genoma, las transiciones de destino celular y la diferenciación. Su deposición se integra con vías epigenéticas de regulación que coordinan la actividad de la ARN polimerasa II, la función de los potenciadores y los complejos de remodelación de la cromatina. La desregulación de la biología de H3.3 y de los patrones de modificaciones postraduccionales es ampliamente relevante en modelos de trastornos del desarrollo y de estados de cromatina oncogénicos, en los que la alteración de los programas transcripcionales y los defectos en el mantenimiento del genoma son fenotipos centrales.
Histone H3.3A El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus H3f3a en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de H3f3a. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de H3f3a. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con H3f3a alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.