Plásmido CRISPR de Activación (h) Histone H1X: sc-411232-ACT

H1FX codifica la histona H1X, una variante de histona de unión (linker) que se une al ADN nucleosomal y contribuye a la compactación de la cromatina de orden superior y a la organización del genoma. Al modular el espaciado de los nucleosomas y la accesibilidad de la cromatina, la histona H1X influye en la regulación transcripcional, el momento de la replicación del ADN y las respuestas al daño del ADN mediante vías de remodelación de la cromatina. La expresión alterada de H1FX o el desequilibrio entre variantes de histona H1 se ha asociado con una desregulación epigenética que puede afectar las transiciones de estado celular, los programas de proliferación y la estabilidad del genoma. Estas características hacen de H1FX un objetivo útil para estudiar la arquitectura de la cromatina, las redes transcripcionales y mecanismos epigenéticos relevantes para enfermedades en células humanas.

Histone H1X El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de H1FX sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Histone H1X El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus H1FX en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional H1FX, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Histone H1X. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo H1FX y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Histone H1X en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Histone H1X en células tumorales con expresión de H1FX silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.