Plásmido CRISPR de Activación (h) Histone Deacetylase 6 (HDAC6): sc-400314-ACT

HDAC6 codifica la histona desacetilasa 6, una desacetilasa predominantemente citoplasmática que regula la acetilación de sustratos no histónicos, incluidos la α-tubulina, la cortactina y HSP90, influyendo así en la dinámica de los microtúbulos, la motilidad celular y la proteostasis dependiente de chaperonas. Mediante el control de la formación de aggresomas dependiente de ubiquitina y su eliminación autofágica, HDAC6 integra la remodelación del citoesqueleto con las respuestas al estrés por proteínas mal plegadas. HDAC6 también modula la señalización en vías vinculadas a la inmunidad innata y a programas transcripcionales inflamatorios, incluidos efectos sobre salidas reguladas por NF-κB. La actividad o expresión desregulada de HDAC6 se ha asociado con fenotipos de células cancerosas, estrés proteotóxico relacionado con la neurodegeneración y mecanismos de enfermedad mediados por el sistema inmunitario, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos.

Histone Deacetylase 6 (HDAC6) El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HDAC6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Histone Deacetylase 6 (HDAC6) El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HDAC6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HDAC6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Histone Deacetylase 6 (HDAC6). A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HDAC6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Histone Deacetylase 6 (HDAC6) en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Histone Deacetylase 6 (HDAC6) en células tumorales con expresión de HDAC6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.