Plasmide Double Nickase (h) Histone Deacetylase 3 (HDAC3): sc-400446-NIC

HDAC3 code l’histone désacétylase 3, une HDAC de classe I qui catalyse le retrait de groupes acétyles de protéines histones et non histones afin de réguler l’accessibilité de la chromatine et les programmes transcriptionnels. HDAC3 agit notamment au sein du complexe corépresseur NCoR/SMRT, reliant le contrôle épigénétique à la signalisation des récepteurs nucléaires, aux réponses transcriptionnelles inflammatoires et à la régulation des gènes du métabolisme. En coordonnant la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et la différenciation spécifique de lignée, HDAC3 contribue au maintien de l’identité cellulaire et de la stabilité du génome. Une activité ou une expression dérégulée de HDAC3 a été impliquée dans des états transcriptionnels oncogéniques, des processus neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, ainsi que des pathologies à médiation immunitaire, ce qui en fait une cible fréquente des études mécanistiques en épigénétique.

Histone Deacetylase 3 (HDAC3) Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HDAC3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HDAC3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HDAC3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HDAC3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.