Plasmide CRISPR d'Activation (h) Histone Deacetylase 3 (HDAC3): sc-400446-ACT

L’histone désacétylase 3 (HDAC3) est une HDAC de classe I qui constitue le cœur de l’activité catalytique des complexes corépresseurs NCoR/SMRT, en retirant des groupements acétyle des queues d’histones ainsi que de certains substrats non histoniques, modulant ainsi l’accessibilité de la chromatine et les programmes transcriptionnels. Par un contrôle épigénétique des états des enhancers et des promoteurs, HDAC3 contribue à la progression du cycle cellulaire, aux réponses aux dommages de l’ADN et à la différenciation spécifique de lignée, et intègre des signaux qui influencent l’expression de gènes métaboliques et inflammatoires. Une activité ou un recrutement d’HDAC3 dérégulés ont été impliqués dans une répression transcriptionnelle aberrante dans de nombreux contextes pathologiques, notamment des cancers ainsi que des troubles neurodéveloppementaux et des affections liées au système immunitaire, où une altération de l’acétylation de la chromatine constitue une caractéristique moléculaire récurrente. En tant que régulateur épigénétique nodal, HDAC3 est fréquemment étudiée pour son impact sur les réseaux transcriptionnels, le remodelage de la chromatine et le contrôle, dépendant du contexte, de l’identité cellulaire.

Histone Deacetylase 3 (HDAC3) Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HDAC3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Histone Deacetylase 3 (HDAC3) Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HDAC3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HDAC3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Histone Deacetylase 3 (HDAC3). Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HDAC3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Histone Deacetylase 3 (HDAC3) au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Histone Deacetylase 3 (HDAC3) dans les cellules tumorales présentant une expression de HDAC3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.