Plasmide CRISPR d'Activation (h) Histone Deacetylase 10 (HDAC10): sc-403221-ACT

HDAC10 code l’histone désacétylase 10, une désacétylase zinc‑dépendante de la famille des HDAC de classe II qui module l’état d’acétylation de substrats histones et non histones afin de façonner l’accessibilité de la chromatine et les programmes transcriptionnels. HDAC10 a été associée à la régulation de l’autophagie et de processus liés aux lysosomes, et contribue à des voies de l’homéostasie cellulaire qui influencent la prolifération, la différenciation et les réponses au stress. Par le contrôle épigénétique de l’expression génique, l’activité de HDAC10 s’inscrit dans des réseaux gouvernant la stabilité du génome et la signalisation inflammatoire. Une expression ou une fonction dérégulée de HDAC10 a été associée à des phénotypes tumoraux altérés et à d’autres états transcriptionnels pertinents pour les maladies, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la régulation épigénétique.

Histone Deacetylase 10 (HDAC10) Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HDAC10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Histone Deacetylase 10 (HDAC10) Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HDAC10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HDAC10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Histone Deacetylase 10 (HDAC10). Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HDAC10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Histone Deacetylase 10 (HDAC10) au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Histone Deacetylase 10 (HDAC10) dans les cellules tumorales présentant une expression de HDAC10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.