Plasmide CRISPR d'Activation (m) Histone Deacetylase 1 (HDAC1): sc-436647-ACT

L’histone désacétylase 1 (HDAC1), codée par le gène murin *Hdac1*, est une désacétylase de lysine de classe I qui enlève des groupements acétyle des histones et de substrats non histoniques afin de réguler l’accessibilité de la chromatine et les programmes transcriptionnels. HDAC1 agit au sein de complexes répresseurs multiprotéiques tels que Sin3, NuRD et CoREST pour coordonner le silençage épigénétique, la progression du cycle cellulaire, la réplication de l’ADN et les décisions de différenciation. Grâce à un dialogue avec les réponses aux dommages de l’ADN et les voies du stress réplicatif, HDAC1 contribue à façonner la stabilité du génome et le contrôle des points de contrôle. Une activité d’HDAC1 dérégulée et des états d’acétylation des histones altérés sont largement associés à des réseaux transcriptionnels aberrants dans des modèles de cancer, des phénotypes neurodéveloppementaux et la signalisation inflammatoire, ce qui en fait un nœud clé pour la recherche mécanistique en épigénétique.

Histone Deacetylase 1 (HDAC1) Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Hdac1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Histone Deacetylase 1 (HDAC1) Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Hdac1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Hdac1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Histone Deacetylase 1 (HDAC1). Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Hdac1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Histone Deacetylase 1 (HDAC1) au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Histone Deacetylase 1 (HDAC1) dans les cellules tumorales présentant une expression de Hdac1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.