Plasmide CRISPR d'Activation (m) Histone cluster 1 H3A: sc-436164-ACT

Hist1h3a code l’histone H3A du cluster d’histones 1, une protéine H3 canonique qui constitue le cœur des nucléosomes et contribue à organiser l’architecture de la chromatine à l’échelle du génome de la souris. Grâce à des modifications post-traductionnelles telles que la méthylation et l’acétylation, H3 intègre des signaux qui régulent les programmes transcriptionnels, le calendrier de réplication de l’ADN et l’accessibilité de la chromatine au cours de la progression du cycle cellulaire et du développement. La dynamique de l’histone H3 participe à l’hérédité épigénétique et coordonne des processus clés, notamment la reconnaissance et la réparation des dommages à l’ADN, l’assemblage des nucléosomes couplé à la réplication et la formation de l’hétérochromatine. Un dosage d’histones dérégulé ou des états de modification de H3 anormaux sont largement associés à l’instabilité génomique et à des profils d’expression génique aberrants observés en oncologie et dans des troubles du développement, ce qui fait de Hist1h3a un nœud utile pour la recherche sur la chromatine et l’épigénétique.

Histone cluster 1 H3A Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Hist1h3a sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Histone cluster 1 H3A Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Hist1h3a dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Hist1h3a, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Histone cluster 1 H3A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Hist1h3a natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Histone cluster 1 H3A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Histone cluster 1 H3A dans les cellules tumorales présentant une expression de Hist1h3a silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.