Plásmido CRISPR de Activación (h) Histamine H1 Receptor: sc-401393-ACT

HRH1 codifica el receptor humano de histamina H1, un receptor acoplado a proteína G que se acopla principalmente a Gq/11 para activar la fosfolipasa Cβ, aumentar el Ca2+ intracelular y estimular la señalización dependiente de PKC. Entre las vías posteriores se incluyen las cascadas MAPK/ERK y programas transcripcionales que regulan la permeabilidad vascular, el tono del músculo liso y la comunicación neuroinmunitaria. La actividad de HRH1 modula el tráfico de células inflamatorias y la producción de citocinas, y se ha relacionado con inflamación alérgica, prurito, hiperreactividad de las vías respiratorias y fenotipos vinculados a la neurotransmisión relevantes para la regulación del ciclo sueño–vigilia. En modelos celulares, HRH1 ofrece un nodo manejable para investigar la dinámica de señalización de los GPCR, el acoplamiento de segundos mensajeros y la expresión génica dependiente del estímulo.

Histamine H1 Receptor El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HRH1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Histamine H1 Receptor El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HRH1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HRH1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Histamine H1 Receptor. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HRH1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Histamine H1 Receptor en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Histamine H1 Receptor en células tumorales con expresión de HRH1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.