hippocalcin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420938

概要

Hpca は、神経型カルシウムセンサーファミリーに属するニューロン性 EF ハンド型カルシウム結合タンパク質である hippocalcin（ヒッポカルシン）をコードしており、Ca2+ の一過性変動をシナプス伝達や興奮性の変化へと結び付けます。Ca2+ が結合すると、hippocalcin は構造変化（コンフォメーションスイッチ）を起こし、膜結合性を調節し得るほか、シナプス可塑性、活動依存的な輸送（トラフィッキング）、ニューロンにおける遺伝子発現プログラムなどの過程に影響を与えます。さらに、神経伝達物質受容体経路や下流のキナーゼ／ホスファターゼ・カスケードと交差するカルシウム依存性シグナル伝達ネットワークに関与し、長期増強（LTP）および長期抑圧（LTD）を形作ります。ニューロンの Ca2+ 恒常性の破綻やカルシウムセンサー機能の変化は、マウスモデルにおける認知表現型の機序研究や、神経変性疾患／神経精神疾患に関連する回路機能障害の研究において重要です。

hippocalcin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるHpca遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Hpca内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Hpcaのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、hippocalcinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、hippocalcinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Hpca欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• hippocalcinの機能に不可欠なHpcaエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Hpcaゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• hippocalcin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびhippocalcin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Hpca遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  hippocalcin HDRプラスミド（m）および hippocalcin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHpcaホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHpca標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。