Plásmido Doble Nickase (h) HIG2: sc-403510-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)HIG2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa HIG2 (h) y el plásmido de doble nickasa HIG2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a HILPDA. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HIG2 Anticuerpo (G-2): sc-376704
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) HIG2 | sc-403510-NIC | 20 µg | $410.00 |
HILPDA codifica la proteína asociada a gotículas lipídicas inducible por hipoxia (HIG2), una proteína pequeña que se localiza en las gotículas lipídicas y se induce fuertemente por la hipoxia y por señales inflamatorias. HIG2 favorece la adaptación celular a bajos niveles de oxígeno al promover el almacenamiento de lípidos neutros y remodelar el manejo de los ácidos grasos, conectando la señalización de HIF con la biogénesis de gotículas lipídicas y las respuestas al estrés metabólico. Esta biología se cruza con vías que controlan la tolerancia al estrés oxidativo, la privación de nutrientes y la activación de la inmunidad innata, lo que convierte a HILPDA en un nodo útil para estudiar la reprogramación metabólica impulsada por la hipoxia. Se ha informado una expresión alterada de HILPDA en contextos de hipoxia tumoral, polarización de macrófagos e inflamación asociada a enfermedades metabólicas, donde la dinámica de las gotículas lipídicas puede influir en el estado celular y en los programas de supervivencia.
HIG2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HILPDA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HILPDA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HILPDA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HILPDA alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.