Plásmido CRISPR de Activación (h) HIF1a: sc-400036-ACT

HIF1A codifica el factor inducible por hipoxia 1 alfa (HIF1a), un factor de transcripción sensible al oxígeno que coordina la adaptación celular a bajas tensiones de oxígeno. Tras estabilizarse, HIF1a dimeriza con ARNT (HIF-1β) y se une a elementos de respuesta a la hipoxia para regular genes que controlan la glucólisis, la señalización angiogénica, la eritropoyesis, la homeostasis del pH y la supervivencia celular. Este programa de detección de oxígeno se integra con la señalización PI3K–AKT–mTOR, el metabolismo mitocondrial y las vías redox, modulando estados inflamatorios y de células inmunitarias, así como la remodelación del estroma. La actividad desregulada de HIF1A se asocia con respuestas a lesión isquémica, inflamación crónica y la biología del microambiente tumoral, lo que lo convierte en un nodo central para estudios mecanísticos de fenotipos impulsados por la hipoxia.

HIF1a El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HIF1A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HIF1a El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HIF1A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HIF1A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HIF1a. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HIF1A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HIF1a en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HIF1a en células tumorales con expresión de HIF1A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.