HIF PHD3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403671

Visão geral

EGLN3 codifica a hidroxilase de prolina 3 de HIF (PHD3), uma dioxigenase sensível ao oxigénio que hidroxila subunidades HIF-α de forma dependente de oxigénio e de 2-oxoglutarato, promovendo a ubiquitinação mediada por VHL e a degradação pelo proteassoma. Por meio desta via canónica da hipóxia, a PHD3 ajuda a ajustar programas transcricionais que controlam a angiogénese, o metabolismo glicolítico, a eritropoiese e a sobrevivência celular em resposta a flutuações na tensão de oxigénio. A atividade de EGLN3 também se cruza com o metabolismo mitocondrial e a sinalização por espécies reativas de oxigénio, ligando o estado nutricional e a disponibilidade de oxigénio à expressão génica adaptativa. A desregulação da expressão ou da função de EGLN3/PHD3 tem sido associada a respostas hipóxicas alteradas na biologia do cancro, ao stress celular relacionado com isquemia e a contextos de tumores neuroendócrinos, sustentando a sua utilização como um nó mecanístico na investigação da hipóxia.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO HIF PHD3 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene EGLN3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do EGLN3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do EGLN3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína HIF PHD3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de EGLN3 para a investigação da sinalização de HIF PHD3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) EGLN3 críticos para a função HIF PHD3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos EGLN3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo HIF PHD3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo HIF PHD3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus EGLN3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo HIF PHD3 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR HIF PHD3 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia EGLN3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo EGLN3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.