HGF CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400433

概要

肝細胞増殖因子（HGF）は分泌型の多機能性サイトカインであり、受容体型チロシンキナーゼであるMET受容体に結合して、上皮―間葉間コミュニケーション、細胞運動性、生存、増殖、形態形成を制御する。HGF–METシグナルはMAPK/ERK、PI3K–AKT、STAT、RhoファミリーGTPase経路を活性化し、組織リモデリング、創傷修復、器官発生を協調的に進める。HGF発現の破綻や経路活性化の異常は、浸潤性増殖プログラム、間質―腫瘍相互作用、ならびに血管新生・炎症性微小環境の変化と関連しており、さまざまな疾患文脈で観察される。間葉系細胞が産生するパラクライン因子として、HGFは微小環境に駆動されるシグナル伝達ダイナミクスを検討する目的で、共培養系やコンディションドメディウム（培養上清）系で頻繁に研究されている。

HGF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHGF遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HGF内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HGFのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HGFタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HGFシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HGF欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HGFの機能に不可欠なHGFエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HGFゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HGF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHGF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HGF遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HGF HDRプラスミド（h）および HGF HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHGFホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHGF標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。