HES7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407096

概要

HES7（hairy and enhancer of split 7）は、ヒト胚発生における体節形成時計（segmentation clock）の中核を担うbHLH型転写抑制因子をコードします。Notchシグナル伝達の下流で機能し、体節形成（somitogenesis）を協調させる振動性の遺伝子発現プログラムを統合するとともに、転写タイミングの厳密な制御と負のフィードバック動態に関与します。HES7活性の変化は体節パターニングを乱し、先天性の椎骨分節異常との関連も報告されていることから、発生における遺伝子制御ネットワークの研究において重要です。細胞モデルでは、HES7は転写抑制作用、Notch経路とのクロストーク、リズミックな発現制御機構における役割の観点から一般的に解析されています。

HES7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHES7遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HES7内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HES7のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HES7タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HES7シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HES7欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HES7の機能に不可欠なHES7エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HES7ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HES7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHES7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HES7遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HES7 HDRプラスミド（h）および HES7 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHES7ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHES7標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。