HES2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407494

概要

HES2は、細胞運命決定を制御する遺伝子発現プログラムを調節する、Hairy/Enhancer-of-splitファミリーに属する塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）型の転写抑制因子をコードします。Notchシグナル伝達の下流エフェクターとして、HES2は分化を抑制し発生のタイミングを協調させる転写フィードバックネットワークに関与し、しばしばプロモーター結合型の抑制作用やコリプレッサー複合体との相互作用を介して機能します。系譜コミットメントおよび増殖—分化バランスに影響することから、HES2活性の変化は、発生異常や、Notch依存性転写回路のがん関連の破綻を扱う研究において重要です。in vitroでは、HES2の攪乱は、前駆細胞の維持、神経新生プログラム、ならびに文脈依存的な分化アウトプットの転写制御を解析する目的で一般的に用いられます。

HES2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHES2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HES2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HES2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HES2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HES2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HES2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HES2の機能に不可欠なHES2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HES2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HES2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHES2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HES2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HES2 HDRプラスミド（h）および HES2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHES2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHES2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。