Hepsin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405081-ACT

ヒトのHPNは、細胞表面に局在するII型膜貫通セリンプロテアーゼであるヘプシンをコードしており、細胞周囲（ペリセルラー）のタンパク質分解や細胞外マトリックス（ECM）のリモデリングを制御します。ヘプシンは、増殖因子の利用可能性、細胞接着、浸潤性行動を調節し得る基質を切断することで、プロテアーゼ駆動型シグナル伝達に関与し、上皮の組織化や組織恒常性を司る経路と結びついています。HPN発現の異常は、上皮分化の変化や腫瘍関連のタンパク質分解プログラムと関連づけられており、細胞移動、バリア機能の維持、微小環境とのクロストークの機構を研究する上で重要です。膜アンカー型プロテアーゼとしてのヘプシンは、プロテアーゼネットワークや、細胞表面でのタンパク質分解によって誘導される下流の転写応答を解析する際にも有用です。

Hepsin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HPNの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Hepsin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HPN 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHPN転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Hepsinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHPN遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHepsin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHPN発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHepsin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。