Plásmido CRISPR de Activación (h) Hepsin: sc-405081-ACT

El gen humano **HPN** codifica **hepsina**, una proteasa de serina transmembrana de tipo II localizada en la superficie celular, donde regula la proteólisis pericelular y la remodelación de la matriz extracelular. La hepsina participa en la señalización impulsada por proteasas al escindir sustratos que pueden modular la disponibilidad de factores de crecimiento, la adhesión celular y el comportamiento invasivo, lo que la vincula con vías que gobiernan la organización epitelial y la homeostasis tisular. La desregulación de la expresión de **HPN** se ha asociado con una diferenciación epitelial alterada y con programas proteolíticos asociados a tumores, lo que la hace relevante para estudiar mecanismos de migración celular, integridad de la barrera y comunicación con el microambiente. Como proteasa anclada a la membrana, la hepsina también resulta útil para investigar redes de proteasas y respuestas transcripcionales downstream desencadenadas por la proteólisis en la superficie celular.

Hepsin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HPN sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Hepsin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HPN en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HPN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Hepsin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HPN y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Hepsin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Hepsin en células tumorales con expresión de HPN silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.