Plasmide CRISPR d'Activation (h) hepcidin: sc-403222-ACT

Le gène humain **HAMP** code l’hepcidine, une hormone peptidique produite par le foie qui constitue un régulateur central de l’homéostasie systémique du fer. L’hepcidine contrôle l’absorption intestinale du fer alimentaire et le recyclage du fer par les macrophages en se liant à l’exporteur de fer **ferroportine** (SLC40A1), ce qui induit son internalisation et sa dégradation, réduisant ainsi l’efflux de fer vers le plasma. Son expression est régulée par des signaux de détection du fer et par des voies inflammatoires, notamment les apports de la voie **BMP/SMAD** via l’hémojuvéline et les complexes **HFE/TFR2**, ainsi que les réponses de phase aiguë médiées par **IL‑6–STAT3**. Une activité dérégulée de l’hepcidine est associée à une redistribution anormale du fer et à un déséquilibre de l’érythropoïèse dans des affections telles que l’hémochromatose héréditaire, l’anémie de l’inflammation et les anémies avec surcharge en fer, faisant de **HAMP** un nœud clé pour l’étude du métabolisme du fer et du dialogue avec l’immunité innée.

hepcidin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HAMP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

hepcidin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HAMP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HAMP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de hepcidin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HAMP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de hepcidin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie hepcidin dans les cellules tumorales présentant une expression de HAMP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.