Plasmide Double Nickase (h) Hemoglobin ε: sc-403392-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Hemoglobin ε correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Hemoglobin ε Double Nickase (h) et le plasmide Hemoglobin ε Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HBE1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Hemoglobin ε | sc-403392-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Hemoglobin ε | sc-403392-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HBE1 code l’hémoglobine ε, une chaîne de globine embryonnaire qui forme des tétramères d’hémoglobine fonctionnels avec des globines de type α afin d’assurer le transport de l’oxygène au cours des premiers stades du développement humain. Son expression est étroitement régulée au sein de la région de contrôle du locus de la β‑globine et du programme de commutation développementale des hémoglobines, ce qui relie HBE1 à la différenciation érythroïde ainsi qu’aux voies de gestion de l’hème et du fer. Une régulation altérée du cluster de globines est pertinente dans les hémoglobinopathies et le stress érythropoïétique, où les profils d’expression des globines développementales peuvent moduler l’équilibre des chaînes de globine. En tant que marqueur des programmes érythroïdes précoces, l’hémoglobine ε est fréquemment utilisée pour étudier l’engagement de lignée et le contrôle transcriptionnel à travers le cluster de gènes de la β‑globine.
Hemoglobin ε Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HBE1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HBE1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HBE1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HBE1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.