HEMK2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406503

概要

N6AMT1（別名HEMK2）は、タンパク質のメチル化を触媒するメチルトランスフェラーゼをコードしており、翻訳の忠実性やリボソーム関連プロセスの制御に寄与します。HEMK2は、翻訳終結因子やリボソーム構成要素のメチル化に関与するとされ、正確なタンパク質合成に依存するプロテオスタシス経路や細胞ストレス応答と結び付けられています。N6AMT1/HEMK2活性の変化は、ゲノム安定性、ミトコンドリアおよび酸化ストレスのシグナル伝達、ならびに増殖制御の破綻に関わる文脈で研究されており、プロテオーム維持が乱れたがん生物学やその他の疾患における機序解明研究に関連性があります。その酵素機能と幅広い細胞内統合性により、翻訳後修飾ネットワークや、下流の転写・代謝適応を調べるための結節点（ノード）としての利用が支持されます。

HEMK2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるN6AMT1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、N6AMT1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、N6AMT1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HEMK2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HEMK2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、N6AMT1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HEMK2の機能に不可欠なN6AMT1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、N6AMT1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HEMK2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHEMK2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、N6AMT1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HEMK2 HDRプラスミド（h）および HEMK2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはN6AMT1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のN6AMT1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。