Plasmide Double Nickase (h) Heme Oxygenase 2: sc-402580-NIC

HMOX2 code l’hème oxygénase 2 (HO-2), une enzyme constitutivement exprimée, associée au réticulum endoplasmique, qui catalyse la dégradation de l’hème en biliverdine, fer libre et monoxyde de carbone. En régulant l’hème intracellulaire et l’équilibre rédox, HO-2 contribue à la cytoprotection, à la fonction mitochondriale et à l’homéostasie du fer, en s’inscrivant dans les réponses au stress oxydant et la signalisation inflammatoire. L’activité de HO-2 influence le tonus vasculaire et la signalisation neuronale via la production endogène de CO, reliant ainsi HMOX2 à des voies pertinentes pour la neurobiologie et le stress cardio-métabolique. Des mécanismes de gestion dérégulée de l’hème et de lésions oxydatives impliquent HMOX2 dans des études sur la neurodégénérescence, des modèles de lésion d’ischémie-reperfusion et les dommages tissulaires inflammatoires, sans présumer de retombées cliniques.

Heme Oxygenase 2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HMOX2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HMOX2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HMOX2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HMOX2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.